產品名稱：酵母樣品直擴PCR鑒定試劑盒

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英文名稱：Yeast Sample Direct Expansion PCR Identification Kit

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儲存條件：-20°C

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應用:科研

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酵母樣品直擴PCR試劑盒

【產品概述】

本試劑盒采用獨特的裂解液，所得產物不受細胞釋放PCR抑制劑影響可以直接用于PCR擴增，可用于酵母等微生物基因擴增分析。

【產品組分】

組分	PD-001 100 rxns （20 μl/rxn）	保存條件
酵母樣品裂解液	10 ml	常溫
2x 直擴PCRMix	1 mL	-20℃

【使用方法】

1. 裂解：用槍頭挑取適量樣品（肉眼可見的明顯菌體團塊），加入到70 μl裂解液中，95℃孵育30分鐘。

2. 離心：12000 rpm，1 min。

3. 基因擴增：取0.5-1 μl上清液用于PCR反應（適用于20 μl反應體系，其他反應體系按比例增加上清液使用量）。

【PCR 反應鑒定】

一、PCR 反應體系

組分	推薦用量	推薦終濃度
2x 直擴PCR Mix	10μl	1X
Forward Primer(10μM)	0.5μl	0.2-0.4μM
Reverse Primer (10μM)	0.5μl	0.2-0.4μM
裂解產物	1μl
ddH2O	補足至20μl

注：各組分使用前應充分混勻。

二、PCR 反應條件

步驟	溫度	時間	循環(huán)數
預變性	98℃	3min	1 cycle
變性	98℃	15sec	35 cycles
退火	56℃	15sec
延伸	72℃	15sec/Kb
終延伸	72℃	5min	1 cycle

*退火溫度：請參考引物的理論Tm值，退火溫度可設置低于引物理論值2-5 ℃，或通過梯度PCR確定最佳溫度。

【注意事項】

1. 模板使用量：建議按1-10%總體系量取用模板，20 μl體系建議采用1 μl上清液作為模板。

2. 引物終濃度：0.2-0.4 μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可在0.1-0.5 μM范圍內調整引物濃度。

3. 反應體系：推薦使用20 μl，也可根據使用習慣調整體系體積大小。

4. 體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。

【瓊脂糖凝膠電泳】

PCR產物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳（無需加入Loading Buffer）。

【對照反應】

在PCR結果分析時，不管是陽性結果或陰性結果，如果沒有對照反應，都不能確定結果是否可靠。為了便于后續(xù)實驗結果的分析，建議在進行PCR時，設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。

注意：本產品僅供科學研究使用，不能用于人、動物的醫(yī)療或診斷程序，不能使用本產品作為食品、化妝品或家庭用品等。